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（4）調節粗調手輪，當看清熒光圖像輪廓後，再用微調手輪調焦，直至看到清晰的熒光圖像，（5）當需要得到較強的熒光圖像時，可轉動聚光鏡旋鈕把聚光鏡移入光路，可獲得較明亮的熒光圖像，使用時可使甘油慢慢浸潤一會兒，然後輕輕左右來回轉動物鏡轉換器以排除氣泡。
3、將高倍鏡移動至一旁，接著將香柏油滴到金相試樣待觀察的部位，這步操作要特別注意，調節時速度不要過快，把零件裝配成部件時也同樣要照上述進行，否則會造成反複裝拆，浪費時間，漏裝零件和增加損壞零件的機會。
2、衍射像：電子束被樣品衍射後，樣品不同位置的衍射波振幅分布對應於樣品中晶體各部分不同的衍射能力，當出現晶體缺陷時，缺陷部分的衍射能力與完整區域不同，從而使衍射波的振幅分布不均勻，反映出晶體缺陷的分布。
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當載物台墊片圓孔中心的位置遠離物鏡中心位置時不要切換物鏡，以免劃傷物鏡，4，亮度調整切忌忽大忽小，也不要過亮，影響燈泡的使用壽命，同時也有損視力，非專業人員不要調整照明係統（燈絲位置燈），以免影響成像質量。
該故障可導致顯微鏡觀察效果下降，具體判斷方法可通過拔下目鏡的向鏡筒裏觀察，如光路有長黴或大塊的汙物，可被清晰的觀察到，同時也可以通過轉動各個光學部件來準確判斷汙物和黴斑的位置，如光路隻是由於時間的關係積塵太多，也可以看到光路不夠透亮。
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選用濾光片時，必須遵守斯托克斯定律：激發濾光片的透射波長<雙色束分離器的透射波長<阻斷濾光片的透射波長，由於熒光圖像一般均較明場觀察暗得多，所以進行熒光顯微攝影需要較長的曝光時間，在曝光時應注意避免儀器震動。
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